Introducción: La enfermedad de Chagas es causada por T. cruzi, el cual  tiene como reservorios primarios a mamíferos selváticos del Género Didelphis capaces de adaptarse al ambiente urbano. En el estado de Campeche, a pesar de que se tiene registro de tres especies de zarigüeyas no hay estudios al respecto. Objetivo: Identificar la prevalencia de infección con T. cruzi en zarigüeyas. Material y métodos: Se realizaron capturas de zarigüeyas con trampas Tomahawk e identificación de la especie por coloración de bigotes y cola, y clasificación en adultos o juveniles con la de erupción de dientes. Se realizó hemocultivo en medio LIT, detección de anticuerpos por ELISA y tipificación de los aislados por la PCR utilizando los oligonucleótidos TC1, TC2  y TCC. Resultados: Se capturaron 25 ejemplares de Didelphis virginiana con un porcentaje de infección general del 52% (13/25). El 46% (6/13) de zarigüeyas resultaron positivas por observación directa al microscopio de luz clara, 100% por hemocultivo en medio LIT y ELISA; los aislados de T. cruzi fueron tipificados como Linaje TCI. Conclusiones: Didelphis virginiana fue la única especie capturada con una prevalencia alta de infección por T. cruzi, lo cual indica su importancia como reservorio en el área urbana.